作者： neopai
如果不减肥，美白真的非常重要
年轻的状态就是苗条与小脸饱满
林青霞
脸色是否黄黑关系不大，青春
但40岁后，减肥真的异常艰难。
白皙美=高贵？
白皙让人联想起不用在太阳下辛劳， 丰腴的体态让人联想起养优处尊。
如果不能瘦而脸部饱满，就一定要美白。还要学会化妆，发型、衣服的搭配……胖的人脸部比较饱满，皱纹一般不多。肤色均匀、白皙可能更重要。
Δ灯光下比较黄，显得状态不好
P图就是更白皙，没有皱纹
小总结：来了解下减龄游戏，说不定你才是高手
20年前，我设计了“肌肤减龄20岁”这么一个游戏，后来升级到“容貌减龄20岁”，现在还想再升级到“生理减龄20岁”。因为看透了这个游戏的本质，觉得挺无聊的。只有不断升级才能唤起玩的兴趣。
我发现玩这个游戏对我很容易，但是对大家很难，因为第一点就几乎没人能做到。读过《谈成分：辅酶Q10+维生素E，容光焕发的效果》，我从一级市场想找这么两个简单成分，都这么不容易。大家从二级市场里找成分，真的非常难。
虽然前面二点我都可以解决。但实施第三点还需要使用者的天分。读过《在“肌肤减龄20岁”公开的实验里，20年如一日，她活成了标杆》，也许你还不明白为什么龙吉在皮肤减龄和容貌减龄方面做得如此出色。在《肌肤减龄更容易，为什么大家都觉得难呢？》这篇小文里我就想通过自己的实践进一步讲清楚：
护花呤的效果？
以上几篇文章讲的是减龄护肤的框架。
在《谈成分：“肌肤减龄20岁”的核心成分？冬虫夏草菌能提取到什么？》，我试图讲清楚护花呤的专利与技术问题。当然，这篇文章，能认真读的人可能很少。
也许大家更关心如何具体使用的问题。我会继续讲清楚每一个产品的主要成分，以及使用方法，特别是注意事项。如：
护花呤逆时塑颜精华霜：
谈成分：“肌肤减龄20岁”的核心成分？冬虫夏草菌能提取到什么？
冬虫夏草菌（蛹虫草菌）与冬虫夏草是有区别的。冬虫夏草是冬虫夏草菌和蝙蝠侠科幼虫的复合体。作为一种真菌，冬虫夏草菌还可以寄生到其它昆虫幼虫的身体里，也可以人工培养。
冬虫夏草菌提取物的一些研究
都说虫草菌提取物有抗肿瘤、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗抑制、降血脂……等许多作用。但事实上，冬虫夏草菌提取物抗肿瘤的研究很多，抗衰老的研究比较少。
虫草素是虫草菌提取物里更特别的成分，有抗癌作用。但我的专利提取方法应该不含这种成分。说句题外话，不少虫草菌的虫草素含量比冬虫夏草还要高。虫草素外，虫草菌提取物还有黄酮、多酚、多糖、腺苷、酶（酵素）……等有效成分。
▲我的专利是：用酸破坏虫草菌，然后中和，然后用多元醇提取……清晰这提取物的主要有效成分后，提取技术改进，我早放弃了这专利。
多元醇提取物抗皱纹作用更强
我们用虫草菌提取物做了一些体外抑制弹性蛋白酶实验，顾名思义，弹性蛋白酶可以分解弹性蛋白，弹性蛋白少了皱纹就出现。能够抑制弹性蛋白酶意味着可以抗皱纹。这是研究抗皱纹有效成分的一个最常用的体外实验。
结果发现，多元醇提取物体外抑制弹性蛋白酶效果较强，而水提取物的效果较差。
▲10%的多元醇提取物受对弹性蛋白酶的抑制作用达到标的物的22%。
▲10%的多元醇提取物中再加入醇溶性生物黄酮，效果更强。抑制作用达到标的物的36%。
分析：
抑制弹性蛋白酶实验活性意味抗皱纹效果。效果差异如此大的原因可能是，虫草菌多元醇提取物里的黄酮主要是金雀异（染料木）黄酮与大豆苷元（参考齐楠等人的论文《虫草黄酮类化合物的生物活性及提取技术研究进展》）。它易溶于醇，溶于热水，但冷水中会析出，这为做产品带来困难。
我们还找到一些抑制弹性蛋白酶活性较强的生物黄酮，所以我们的产品也变得有些微黄了。当然，以后脱色技术的提高会使产品变得没有颜色。
如果一定要说明护花呤核心产品为什么有较强的抗皱效果？以上实验可能是一个解释。当然，以上实验结果只是护花呤公司的研究，不是第三方的医学证明。
关于金雀异黄酮的抗肿瘤、抗衰老、抗皱纹的研究，国外有很多很多医学论文。不过，除了生物黄酮，虫草菌提取物还存在着其他的有效成分。我尝试过，只用金雀异黄酮做出来的护肤品，效果比不上现在的护花呤核心产品。
反省，还没成功的尝试
无独有偶，一家法国大公司用欧洲七叶树花多元醇提取物做抗皱眼霜原料，近年获得了世界护肤品原料银奖。
▲他们公司的资料上，也认为主要有效成分是生物黄酮，说他们公司有技术能提取出更高含量的生物黄酮。
由于我一直没发现比护花呤抗皱效果更强的眼霜。看到他们获奖自然兴奋，当时立即联系他们，国内第一家用这个原料做了一个抗皱产品——弹力嫩肤霜，尝试跟护花呤的核心产品打比赛。
由于我们的主席见过这家公司的主席，还有获世界大奖的成分。这些噱头让弹力嫩肤霜卖出了很多，但是反馈不很理想，大家都认为效果比不上护花呤眼霜。回头率也不高。挑战失败后，暂时就停产了。
我认为减龄护肤的底层逻辑是：要使护肤有效，第一要用上经过医学证明的、对人体皮肤细胞长期使用长期有效的成分，第二用透皮吸收剂让有效成分进入真皮层，第三要保证有足够的用量……
弹力嫩肤霜停产一段时间了，但我还在继续研究欧洲七叶树多元醇提取物，也许我们的生产工艺没有保护好它的有效成分，也许没有像生产护花呤核心产品那样对它进行包裹……
真的想做出一个比护花呤核心产品更强、更温和的抗皱产品。
关于生物黄酮
生物黄酮古老而神秘，是一个非常有前景的发展方向。这两年看到很多论文，说生物黄酮有强大的抗新冠病毒的作用。
自然界的生物黄酮有5000多种，广泛分布于植物中。每一种植物提取物都几乎有它的身影，无论抗衰老、抗癌、抗病毒，它都是主要的生力军。
以下引用维基百科上的一个表格：
减龄游戏公众号
护花呤已经有两个公众号，一个“护花呤”一个“年轻态”，都是服务号。现在增加一个订阅号“减龄游戏”，关注后折叠在“订阅号消息”里，你不主动看它不会干扰你。
我不参与其他公号的写作，所以“减龄游戏”的内容与“护花呤”、“年轻态”不同，目前主要聊各种抗衰老护肤成分及使用方法。这是我较专长的领域，对成分党可能有帮助。
为什么一开始就提出“皮肤减龄20岁”的小目标？
因为2001年我看到的实验室结果是，皮肤细胞在培养基里寿命只可以延长约20%，但一直保持年轻状态，直到衰亡。所以我认为用上这些技术，我们的皮肤可以50岁，甚至60岁仍然保持20-30岁的状态，就提出了“肌肤减龄20岁”的减龄游戏小目标。
《减龄游戏》目录
护肤品新规，不但利好消费者，还利好国产替代
顾客都希望自己能买到更有效果更安全的产品，所以国家今年开始执行护肤品新规。所有声称功效的护肤品每个都必须做功效测评报告，确定有那种功能你才可以备案产品，才可以生产，才可以标示，才可以宣传。
而且做这些检测挺贵，有些功效测评一项就要好几万。真的严格的话，产品多的公司也许要做几千上万项功效测评。
做护肤品再不是以前那样低门槛了。那些效果经不起测评检验、以往靠广告宣传销售的的企业就不敢做了，今年就我所知的，很多家认识的护肤品公司直接注销了。
护花呤的功效测评报告正在逐步出来，每拿到手一份我便觉得腰杆子硬了一分。
大家都知道，护花呤护肤品首先是做给我用的，当然要求更强效更安全。以前我向顾客推荐产品都是我自己用过，觉得效果很好才推荐，但我皮肤很白，精华水我没有使用，它是专门为有祛黄提亮要求的顾客做的。
看到测评报告才明白，怪不得大家都说精华水的祛黄提亮效果很好，原来把它稀释到0.78%的浓度对自由基都还有92%的清除率。
为什么紫色软管的舒缓滋润保湿霜抗敏修复的效果好，它只需要0.15~10%的浓度就可以有65~104%的抗炎，促进胶原合成，恢复皮肤厚度的功效了。它还是长效的保湿产品，测试结果表明，8个小时后仍然有70%以上的保湿效果。
国家政策行业监管逐渐变严，对我们反倒是利好，终于有能自证自辩的机会。我们希望国家的标准更严，最好所有产品都像防晒产品那样，通过功效测评，标明效果指数。
一个防晒产品有没有效果？效果有多强？我们看它的防晒指数就可以简单了解。所以我们希望所有产品都像防晒产品那样，无论保湿产品，抗氧化产品，抗皱紧致产品，都通过功效测评，用指数来表达效果。
这样，消费者就更容易找到自己需要的产品，也不容易受广告欺骗。
旧新闻
这新闻现在网上还有的，大家可以搜索一下。
2015年5月7日，中国消费者协会公布了对市场上销售的宣称有保湿功效的26款面贴膜商品的比较试验结果。结果发现资生堂与SK-II面膜有荧光现象，最便宜的一款国产面膜的效果就比许多世界名牌都好很多。
但我们有顾客说买了中国消费者协会推荐的面膜发现上当了……效果最好的那款面膜是含油的乳液面膜，肤感不太好，不适宜夏天使用。含油的乳液面膜跟不含油的水性面膜应该采用不同标准，中国消费者协会不专业。
有感
国产替代是中国崛起的国策，而国产替代的关键是标准。在标准化的行业，有些我们做到了，超越了欧美。但是在非标准化行业，很难。除非我们的文化自信达到另一个高度。
护肤品本应是标准化行业，但是使用者多是女性，感性消费的结果就去标准化了，大家冲着广告，充着名牌去买。
大浪淘沙，护肤行业也在重新洗牌，那些三无野鸡不规范的企业会被淘汰，所有虚浮的泡沫也将被时代撇去。未来大牌和国货的地位调换，不是不可能。
连俄乌战争都出现了，没有什么不可能，我们这代人将会见证诸多历史，未来是靠实力说话，希望大家对国货有信心，对护花呤增加信任。
利用自身的力量
我开篇就说，自己不手术、不放疗、不化疗、不做免疫治疗、甚至不用药物……用“身体的力量”把肿瘤消除了。那么，身体的力量是什么？
身体的力量当然不是狭义的力气大小。排泄能力，解毒能力，免疫能力，抗氧化能力，再生能力……各器官的功能是身体力量的一部分，还有精神、神经、意念的力量，激素的平衡，积极的态度，愉悦的情绪，忘我，入静、良好的睡眠……等等。这些都是我们可以动用的身体的力量。
对慢性病的防治，与治疗感染性疾病原理根本不一样。一般并不是找到某种特效药物就可以解决的。许多慢性病，都是10年，20年不良生活习惯的积累造成，你需要用终身的改变来治疗它。
比如简单的颈椎病，这方面我的经验也非常丰富
而是需要动用身体的力量，营造一个新的环境，一个肿瘤不喜欢的环境
情绪、
意念，忘我，积极信息，美与开阔，愉悦香味，入静，态度，
高压氧疗法可增加端粒的长度并减少离体血细胞的免疫衰老：一项前瞻性试验
新闻
https://www.medsci.cn/article/show_article.do?id=a349203e1892
简介：衰老的特征是生理能力的逐渐丧失。在细胞水平上，衰老过程的两个关键标志包括端粒长度（TL）缩短和细胞衰老。使用某些高压氧疗法（HBOT）反复进行的间歇性高氧暴露可引起再生效应，这种效应通常在缺氧期间发生。当前研究的目的是评估HBOT是否会影响正常，非病理，老龄成年人口中的TL和衰老细胞浓度。
方法：招募了35名64岁及以上的健康独立生活的成年人，每天接受60次HBOT暴露。全血样品收集基线，在30次和60次，最后HBOT会议之后会话，1-2周。评估外周血单个核细胞（PBMC）端粒的长度和衰老。
结果：HBOT后，T辅助细胞，T细胞毒性，天然杀伤细胞和B细胞的端粒长度显着增加了20％以上。最显著变化是在B细胞，其在30增加注意到次会议上，60个由25.68％±40.42（p值= 0.007），29.39％±23.39（p值= 0.0001）和37.63％±52.73（对会话和交高压氧= 0.007）。
HBOT后衰老的T辅助细胞数量显着减少-37.30％±33.04（P <0.0001）。HBOT后T细胞毒性衰老细胞百分比显着下降-10.96％±12.59（p = 0.0004）。
总之，该研究表明，HBOT可能诱导明显的衰老作用，包括显着增加衰老人群的端粒长度和衰老细胞的清除率。
介绍
衰老的特征是生理完整性的逐渐丧失，导致功能受损以及对疾病和死亡的敏感性。这种生物恶化被认为是尤其是癌症，心血管疾病，糖尿病和阿尔茨海默氏病的主要危险因素。在细胞水平上，衰老过程有两个关键标志：端粒长度的缩短和细胞衰老[ 1 ]。
端粒是位于染色体末端的串联核苷酸重复序列，可维持基因组稳定性。端粒在复制（有丝分裂）过程中会缩短，这是由于固有的无法完全复制落后的DNA链末端的原因[ 2 ]。端粒长度（TL），4至15个碱基之间测量，逐渐缩短每年由〜20-40个碱基，并与不同的疾病，低物理性能和大脑[的皮质变薄相关联3 – 5 ]。当TL达到临界长度时，细胞将无法复制并发展为衰老或程序性细胞死亡[ 6 ]。Goglin等。证明，拥有更短TL的成年人死亡率增加[ 7]。缩短TLS可直接遗传性状，但一些环境因素也与缩短TL包括应激相关，缺乏身体耐力活动，过量身体质量指数，吸烟，慢性炎症，维生素缺乏和氧化应激的2，8，9 ]。
细胞衰老是细胞周期的停滞，这可能是由端粒缩短[ 10 ]以及其他与TL相关的衰老相关刺激（例如非端粒DNA损伤）引起的[ 1 ]。衰老的主要目的是通过触发受损细胞通过免疫系统的清除来防止受损细胞的繁殖。衰老细胞随着衰老的积累反映出这些细胞的生成增加和/或它们的清除率降低，这反过来加剧了损害并加剧了衰老[ 1 ]。
越来越多的研究身体已经发现了几个药理学试剂，可以降低端粒缩短率[ 11，12 ]。几个生活方式干预包括耐力训练，饮食和补充剂靶向细胞代谢和氧化应激已经报道相对小的效果（2-5％）上TL 3， [ 2，8，9 ]。
高压氧疗法（HBOT）在高于一个绝对大气压（ATA）的环境压力下利用100％的氧气来增加溶解在人体组织中的氧气量。重复间歇高氧暴露，使用某些HBOT协议，可诱导通常在高氧环境缺氧时发生，所谓的高氧缺氧悖论[生理效应13 – 16 ]。此外，最近有研究表明，HBOT可以通过涉及脑血流区域变化的机制来诱导健康衰老成年人的认知增强[ 17]。]。在细胞水平上，已证明HBOT可以诱导缺氧诱导因子（HIF），血管内皮生长因子（VEGF）和sirtuin（SIRT）的表达，干细胞增殖，线粒体生物发生，血管生成和神经发生[ 18 ]。但是，迄今为止，尚无研究检查HBOT对TL和衰老细胞积累的影响。
当前研究的目的是评估HBOT是否会影响成年人的TL和衰老样T细胞。
结果
35个人被分配到HBOT。五名患者未完成基线评估，被排除在外。所有完成基线评估的30名患者均完成了干预措施。由于血液样本质量低（细胞数量少或技术人员错误），端粒分析中排除了4例患者，衰老细胞分析中排除了10例患者（图1）。表1提供了患者被排除后的基线特征和队列比较。三组之间无显着差异（表1）。
图1. 患者流程图。
表1.基线特征。
| HBOT | 端粒分析 | 衰老分析 | P值 | ||
| ñ | 30 | 25（83.3％） | 20（66.6％） | ||
| 年龄（岁） | 68.41±13.2 | 67.56±14.35 | 66.70±16.00 | 0.917 | |
| 体重指数 | 26.77±3.20 | 26.89±3.34 | 27.14±3.81 | 0.946 | |
| 雄性 | 16（53.3％） | 13（52.0％） | 10（50.0％） | 0.987 | |
| 雌性 | 14（47.7％） | 12（48.0％） | 10（50.0％） | 0.987 | |
| 全血细胞计数 | |||||
| 血红蛋白 | 6.33±1.25 | 6.57±1.15 | 6.58±1.29 | 0.707 | |
| 白血细胞 | 14.02±1.40 | 13.92±1.35 | 13.97±1.49 | 0.969 | |
| ％PBMC | 39.96±6.75 | 39.25±6.64 | 38.59±6.63 | 0.774 | |
| 血小板 | 239.87±1.39 | 244.08±43.0 | 254.05±41.4 | 0.559 | |
| 慢性病 | |||||
| 心房颤动 | 4（13.3％） | 4（16.0％） | 2（10.0％） | 0.841 | |
| 甲状腺功能减退 | 4（13.3％） | 4（16.0％） | 3（15.8％） | 0.956 | |
| 阻塞性睡眠呼吸暂停 | 4（13.3％） | 4（16.0％） | 3（15.0％） | 0.961 | |
| 哮喘 | 1（3.3％） | 1（4.0％） | 0 | 0.680 | |
| 前列腺增生症 | 7（23.3％） | 5（20.0％） | 6（30.0％） | 0.733 | |
| 格尔德 | 3（10％） | 2（8.0％） | 2（10.0％） | 0.961 | |
| 骨质疏松症 | 5（16.7％） | 5（20.0％） | 4（20.0％） | 0.936 | |
| 风湿性关节炎 | 1（3.3％） | 0 | 1（5.0％） | 0.561 | |
| 骨关节炎 | 7（23.3％） | 4（16.0％） | 5（25.0％） | 0.755 | |
| 糖尿病 | 3（10％） | 3（12.0％） | 2（10.0％） | 0.966 | |
| 高血压 | 7（23.3％） | 5（20.0％） | 5（25.0％） | 0.918 | |
| 血脂异常 | 16（53.3％） | 14（56.0％） | 12（60.0％） | 0.897 | |
| 缺血性心脏病 | 2（6.7％） | 1（4.0％） | 2（10.0％） | 0.725 | |
| 吸烟史 | 10（33.3％） | 8（32.0％） | 7（35.0％） | 0.978 | |
| 慢性药物 | |||||
| 反聚集 | 8（26.7％） | 6（24.0％） | 5（25.0％） | 0.974 | |
| ACE抑制剂/ ARB阻滞剂 | 6（20％） | 6（24.0％） | 6（30.0％） | 0.720 | |
| Beta阻滞剂 | 5（16.7％） | 5（20.0％） | 3（15.0％） | 0.901 | |
| 钙阻滞剂 | 3（10％） | 3（12.0％） | 2（10.0％） | 0.966 | |
| 阿尔法阻滞剂 | 7（23.3％） | 5（20.0％） | 6（30.0％） | 0.733 | |
| 利尿剂 | 2（6.7％） | 1（4.0％） | 1（5.0％） | 0.906 | |
| 他汀类 | 10（33.3％） | 9（36.0％） | 7（35.0％） | 0.978 | |
| 口服降糖 | 1（3.3％） | 1（4.0％） | 1（5.0％） | 0.958 | |
| 双膦酸盐 | 1（3.3％） | 1（4.0％） | 1（5.0％） | 0.958 | |
| 质子泵抑制剂 | 3（10％） | 3（12.0％） | 3（15.0％） | 0.726 | |
| 激素 | 3（10％） | 3（12.0％） | 2（10.0％） | 0.966 | |
| 苯二氮卓类 | 3（10％） | 2（8.0％） | 1（5.0％） | 0.816 | |
| 精神病研究所 | 5（16.7％） | 5（20.0％） | 3（15.0％） | 0.990 |
端粒长度
与基线相比，第30届会议和HBOT后T辅助端粒长度显着增加21.70±40.05（p = 0.042），23.69％±39.54（p = 0.012）和29.30±38.51（p = 0.005） ）（图2）。但是，重复测量分析显示出不显着的趋势（F = 4.663，p = 0.06，表2和图2）。
图2. 端粒长度随HBOT变化。平均值+ SEM * p ＜0.05，** p ＜0.01，*** p ＜0.001。
表2. HBOT后端粒长度和衰老细胞的变化。
与基线相比，B细胞的端粒长度在30显著增加次会议上，60个会议和25.68％-HBOT交±40.42（p值= 0.007），29.39％±23.39（p值= 0.0001）和37.63％±52.73（ p = 0.007）（图2）。重复测量分析显示了显着的组内效应（F = 0.390，p = 0.017，表2和图2）。
与基线相比，第30届会议（p = 0.045）和第60届会议的自然杀伤细胞端粒长度显着增加了20.56％±33.35（p = 0.013）。HBOT后，HBOT后端粒长度增加了22.16％±44.81（p = 0.06，表2和图2）。重复测量分析表明，在第30个疗程后没有其他显着影响（F = 0.812，p = 0.391）。
与基线相比，细胞毒性T细胞在第30届会议上没有显着增加，增幅为18.29％±45.62（p = 0.11），随后在第60届会议上显着增加了24.13％±40.88 （p = 0.0019） HBOT后为19.59％±33.98（p = 0.023）。重复测量分析表明，在第30个疗程后，没有其他明显的影响（F = 1.159，p = 0.310，表2和图2）。
衰老细胞
有在衰老T-辅助细胞的数量在30非显著下降个会话，并且60个分别由-19.66％±80.03（p值= 0.09）和-11.67％±94.30（p值= 0.20）会话。但是，HBOT后衰老的T辅助者数量显着下降-37.30％±33.04（P <0.0001，图3）。重复测量分析显示，即使在第30次治疗后仍具有显着的连续作用，并具有组内作用（F = 8.547，p = 0.01，表2和图3）。
图3. HBOT引起的衰老细胞变化。平均值+ SEM * p ＜0.05，** p ＜0.01，*** p ＜0.001。
在第30届HBOT会议上，T细胞毒性衰老细胞百分比显着下降-12.21％±8.74（P <0.0001），在第60届HBOT会议上（0.002）下降-9.81％±9.50和-10.96％±12.59（p = 0.0004） HBOT后）（表2和图3）。重复测量分析显示，即使在第30次治疗后仍具有显着的连续作用，具有组内效应（F = 6.916，p = 0.018，表2）。
HIF-1α
在第60届会议上，HIF-1alpha水平从10.54±3.39增加到19.71±3.39 （p = 0.006），其中HBOT后2周的水平为16.81±7.65，与基线无显着差异（p = 0.16）。
讨论
在这项研究中，首次在人类中发现，在老龄化人群中，每天重复进行HBOT疗程可使PBMC端粒长度增加20％以上，其中B细胞的变化最为显着。此外，HBOT使衰老细胞的数量减少了10-37％，其中T辅助衰老细胞受到的影响最大。
已经观察到端粒长度和生活方式改变之间的大量关联。这导致了几项干预性研究，包括饮食，补品（例如omega-3和核桃），体育锻炼，压力管理和社会支持。一项对认知健康的老年人进行的为期两年的试验，使用富含核桃的饮食，与对照饮食相比，保留端粒长度的趋势不明显[ 19 ]。在另一项评估对老年人进行十二周低频爆炸性抵抗训练的效果的研究中，干预组的端粒长度得到了更好的保留，而没有显着增加[ 20]。]。最近的一项研究发现，有氧耐力训练或六个月的高强度间歇训练可使端粒长度增加5％[ 21 ]。额外的减肥，瑜伽和压力管理技术未能显示端粒长度的显着变化[ 22 – 25 ]。然而，大多数这些研究已显示抗氧化活性和端粒酶活性[之间显著相关性22 – 25 ]。
尽管许多遗传和环境因素与端粒缩短有关，但最常见的提示机制是氧化应激。氧化应激可能是由于活性氧（ROS）与细胞清除剂的产生不平衡而引起的。端粒对氧化性DNA损伤高度敏感，后者可导致端粒缩短和功能障碍[ 26 ]。氧和/或氧化应激与端粒长度之间的关系在过去的几十年中一直存在争议。人类细胞培养研究一致表明，轻度的氧化应激会加速端粒缩短，而抗氧化剂和自由基清除剂会降低缩短速率并延长细胞增殖寿命[ 27]。对病理状况（例如糖尿病，炎性疾病，帕金森氏病）的一些临床研究表明，氧化应激标记，活性氧清除剂水平和端粒长度之间存在相关性[ 28 ]。然而，健康的个体没有显示出相似的结果[ 29 ]。
以前已经有人提出将细胞培养物暴露于高压环境中会诱导明显的氧化应激和过早的细胞衰老[ 30 ]。但是，这是基于高压培养箱中生长的分离细胞，而不是像本研究中那样基于人类的复杂生物系统。与目前的研究相似，先前对暴露于强高压氧的潜水者进行的为期一年的前瞻性观察研究显示，白细胞中端粒的伸长显着[ 31 ]。如在当前的研究中所使用的，高压氧协议利用由重复间歇高氧暴露致的影响，即所谓的高氧缺氧悖论[ 13，18]。这些间歇性的高氧暴露引起适应性反应，包括增加抗氧化剂基因的上调[ 32 ]和产生抗氧化剂/清除剂，以适应增加的ROS生成，从而导致ROS /清除剂的比例逐渐变得与正常氧气环境下的比例相似。但是，由于清除剂消除半衰期（T 1/2）明显大于ROS的T 1/2，因此在重复常高氧暴露后，恢复正常氧水平后，清除剂的水平显着提高，抗氧化活性提高[ 13]，18]。因此，类似于体育锻炼和热量限制，每天重复进行HBOT协议可能会引起兴奋现象。单个曝光增加ROS产生剧烈，引发抗氧化反应，并用重复暴露，响应变得保护[ 13，18 ]。
另外，间歇性的高氧暴露引起许多在缺氧期间发生的生理反应[ 13 ]。HBOT诱导称为低氧诱导因子（HIF）的转录因子的释放，并增加其稳定性和活性[ 14 ]。反过来，HIF诱导细胞级联反应，包括血管内皮生长因子和血管生成诱导，线粒体生物发生，干细胞动员和SIRT1活性增加[ 18 ]。我们的研究证实，重复的HBOT暴露会诱导HIF表达增加，而在非单声环境下，HOT的水平会随着正常水平的降低而逐渐降低。
目前，在动物模型中已开发出许多通过遗传或药理学方法（衰老药）去除衰老细胞的干预措施，并正在等待人类的安全性和有效性评估[ 33 ]。当前的研究提出了一种非药理学方法，可用于减少衰老细胞数量的临床安全性概况。我们的协议包括在2 ATA进行60次100％的氧气处理，包括每次使用三个空气中断，以利用高氧低氧悖论并使氧气中毒的风险最小化。有趣的是，TL和衰老细胞减少峰值在30个会议。但是，与施加的压力，时间和HBOT暴露次数有关的剂量反应曲线及其与HIF表达及其相关的再生效应的关系仍不完全清楚，需要进一步研究以找到最佳的HBOT方案。
高压氧疗法是一种针对非愈合伤口，放射线损伤以及不同的缺氧或缺血事件（例如一氧化碳中毒，感染等）的行之有效的治疗方式。近年来，从临床前一个越来越多的证据以及临床试验表明高压氧用于治疗神经适应症，包括特发性突发性感觉神经性听力损失[功效34 ]，卒中后和后创伤性脑损伤[ 35 – 41 ]，中枢致敏综合征如纤维肌痛综合征[ 42，43 ]和年龄相关的认知衰退[ 17 ]和动物阿尔茨海默氏病的模型[ 44]。本研究首次旨在评估无任何功能受限疾病的衰老人类对细胞水平的生理影响。
研究局限性
当前的研究有几个局限性和需要考虑的优点。首先，必须考虑有限的样本量。第二，缺乏对照组。但是，这项研究表明，在TL和衰老细胞清除方面，令人印象深刻的结果在其他干预措施中均未观察到。此外，我们队列的基线端粒长度值与老龄化人群的预期值[ 45 – 47]。第三，效果的持续时间有待长期随访确定。第四，由于选择了用于血液保存和评估的方法，因此未评估端粒酶活性。但是，应该强调一些优势。在这项研究中，CD28用作衰老细胞的生物标志物，而CD57不能用作T细胞衰老的确认性标志物。在特定的白细胞群体上评估生物标志物，而不是将整个PBMC用作一组。对孤立的HBOT效果进行了测量，并对参与者进行了监控，以确保他们没有改变生活方式（如营养和运动），用药或任何其他可能造成混淆的干预措施。
总而言之，该研究表明，HBOT可以诱导明显的衰老作用，包括端粒长度的显着增加和衰老群体中衰老细胞的清除。
材料和方法
科目
入选了三十五名未发生病理性认知减退的成年人，年龄在64岁及以上，他们以良好的功能和认知状态独立生活。该研究在2016年至2020年之间在以色列的Shamir（Assaf-Harofeh）医疗中心进行。被纳入的患者在被纳入之前的最后一年没有心脏或脑血管局部缺血的病史。排除标准包括：在过去三个月中因任何原因先前接受过HBOT治疗，在过去一年中有任何恶性病史，任何病理性认知功能下降，严重的慢性肾衰竭（GFR <30），不受控制的糖尿病（HbA1C> 8，禁食）血糖> 200），免疫抑制剂，MRI禁忌症（包括BMI> 35），积极吸烟或肺部疾病。
学习规划
该研究方案已获得以色列沙米尔医学中心的机构审查委员会的批准。这项研究是一项前瞻性临床试验。签署知情同意书并进行基线评估后，将受试者分配到HBOT。在基线，治疗方案的一半（第30次治疗），最后一次HBOT治疗的当天以及HBOT治疗后1-2周评估测量点。
该研究队列仅包括接受HBOT治疗的患者，这是在以色列Shamir医学中心研究的较大的正常衰老人群的一部分（NCT02790541 [ 17 ]）。
干预措施
HBOT协议在Multiplace Starmed-2700实验室（德国HAUX）中进行管理。该协议包括60个每日课程，三个月内每周五个课程。每节课包括在2ATA处通过口罩呼吸100％的氧气90分钟，每20分钟休息5分钟。压缩/减压速率为1米/分钟。在试验期间，不允许改变生活方式和饮食习惯，也不允许调整药物治疗。
血液样本
使用标准技术，在基线，HBOT方案的一半（第30个疗程），最后一次HBOT疗程的一天（第60个疗程）和术后1-2周将全血样品收集到EDTA试管中。上次HBOT会话。
外周血单核细胞（PBMC）分离
使用磷酸盐缓冲盐水（PBS）稀释全血。使用装满Lymphoprep的Leucosep管进行密度梯度分离。然后将试管在25°C下以1000x g离心10分钟。离心后，立即通过移液管收集细胞层（血沉棕黄层），并转移至50 mL锥形离心管中，用足够的1X PBS重悬至50 mL的体积，并在300x g下于25°C离心10分钟。除去上清液后，标记每个样品。
端粒长度
根据Dako PNA / FITC试剂盒规程（代码K5327）标记端粒。在由PBMC（样品细胞）和TCL 1301细胞系（对照细胞）的混合物组成的单细胞悬液中，在没有探针的杂交溶液存在下，在微量离心管中于82°C将DNA变性10分钟。在含有荧光素缀合的PNA端粒探针的杂交溶液中进行电泳。杂交在黑暗中在室温（RT）下进行过夜。杂交后，在40°C用洗涤溶液进行两次10分钟的杂交后杂交。然后在适当的缓冲液中用CD4 +，CD8 +，CD3 +，CD19 +和CD56 +缀合的抗体标记样品，以进行进一步的流式细胞术分析[ 48]，49]。每个样品一式两份运行。流式细胞仪分析后，计算CD3 + / CD4 +（T-辅助），CD3 + / CD8 +（T-细胞毒性），CD3 + / CD56 +（天然杀伤力）和CD19 +（B细胞）的相对端粒长度（RTL）。将RTL值计算为每个样品的端粒信号与对照细胞（TCL 1301细胞系）之间的比率，并校正了G0 / 1细胞的DNA指数。使用碘化丙啶染色分别分析样品细胞和对照细胞的DNA倍性，以标准化每个细胞的端粒末端数，从而标准化每个染色体的端粒长度。有关FACS分析示例，请参见图4。
图4. T辅助亚群的流鱼数据分析示例。在数据采集之前，将每个血液样本用PNA探针（ b）染色或不使用（ a）染色，然后进行抗体染色（CD3，CD4，CD8，CD16，CD19）。
免疫分型
通过流式细胞术分析确定CD3 + CD4 + CD28-无效的T细胞（衰老的T辅助细胞）和CD3 + CD8 + CD28-无效的T细胞（衰老的T细胞毒性）的百分比。PBMC用VioBlue共轭抗CD3，Viogreen共轭抗CD8，PE-VIO 770A共轭抗CD4和APC-VIO 770A抗CD28抗体（Miltenyi Biotec）染色。用MACSQuant流式细胞仪（Miltenyi Biotec）分析细胞。然后计算CD4 +或CD8 + T细胞群中CD28null T细胞的百分比。
缺氧诱导因子（HIF-1alpha）
固定和通透化（Life Technologies）后，用APC偶联的抗HIF1a抗体或相应的同型对照（R＆D系统）进行细胞内HIF1a染色。用MACSQuant流式细胞仪（Miltenyi Biotec）分析细胞，并确定表达HIF1a的PBMC的百分比。
统计分析
除非另有说明，否则连续数据表示为均值±标准差。使用Kolmogorov-Smirnov检验对所有变量的正态分布进行了检验。进行了单向方差分析，以比较基线时三组之间和之内的变量。
分类数据以数字和百分比表示，并通过卡方检验进行比较。使用Chi-Square / Fisher精确检验进行单变量分析，以识别显着变量（P <0.05）。
为了评估HBOT的作用，使用重复测量ANOVA模型来测试主要的受试者内作用。使用带有Bonferroni校正的t检验对方法进行事后检验，以检验时间差异。
密码保护：人类中总有人神一样存在——谈偶像学习法
《总有一种力量它让我们泪流满面》——南方周末1999年新年献词
这是新年的第一天。这是我们与你见面的第777次。祝愿阳光打在你的脸上。
阳光打在你的脸上，温暖留在我们心里。这是冬天里平常的一天。北方的树叶已经落尽，南方的树叶还留在枝上，人们在大街上懒洋洋地走着，或者急匆匆地跑着，每个人都怀着自己的希望，每个人都握紧自己的心事。
本世纪最后的日历正在一页页减去，没有什么可以把人轻易打动。除了真实。人们有理想但也有幻象，人们得到过安慰也蒙受过羞辱，人们曾经不再相信别人也不再相信自己。好在岁月让我们深知“真”的宝贵——真实、真情、真理，它让我们离开凌空蹈虚的乌托邦险境，认清了虚伪和欺骗。尽管，“真实”有时让人难堪，但直面真实的民族是成熟的民族，直面真实的人群是坚强的人群。
没有什么可以轻易把人打动，除了正义的号角。当你面对蒙冤无助的弱者，当你面对专横跋扈的恶人，当你面对足以影响人们一生的社会不公，你就明白正义需要多少代价，正义需要多少勇气。
没有什么可以轻易把人打动，除了内心的爱。没有什么可以轻易把人打动，除了前进的脚步……
这是新年的第一天，就像平常一样，我们与你再次见面，为逝去的一年而感怀，为新来的一年作准备。祝愿阳光打在你的脸上。
因为有你，才有我们。
阳光打在你的脸上，温暖留在我们心里。为什么我们总是眼含泪水，因为我们爱的深沉；为什么我们总是精神抖擞，因为我们爱的深沉；为什么我们总在不断寻求，因为我们爱的深沉。爱这个国家，还有她的人民，他们善良，他们正直，他们懂得相互关怀。
阳光打在你的脸上，温暖留在我们心里。有一种力量，正从你的指尖悄悄袭来，有一种关怀，正从你的眼中轻轻放出。在这个时刻，我们无言以对，惟有祝福：让无力者有力，让悲观者前行，让往前走的继续走，让幸福的人儿更幸福；而我们，则不停为你加油。
我们不停为你加油。因为你的希望就是我们的希望，因为你的苦难就是我们的苦难。我们看着你举起锄头，我们看着你舞动镰刀，我们看着你挥汗如雨，我们看着你谷满粮仓。我们看着你流离失所，我们看着你痛哭流涕，我们看着你中流击水，我们看着你重建家园。我们看着你无奈下岗，我们看着你咬紧牙关，我们看着你风雨度过，我们看着你笑逐颜开……我们看着你，我们不停为你加油，因为我们就是你们的一部分。
总有一种力量它让我们泪流满面，总有一种力量它让我们抖擞精神，总有一种力量它驱使我们不断寻求“正义、爱心、良知”。这种力量来自于你，来自于你们中间的每一个人。
所以，在这样的时候，在这新年的第一天，我们要向你、向你身边的每一个人，说一声，“新年好”！祝愿阳光打在你的脸上。